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飼料中維生素A的液相(HPLC)檢測(cè)方案 

近期,隨著經(jīng)濟(jì)的復(fù)蘇,維生素類飼料添加劑銷售量大大增加,全球原料藥大制造商帝斯曼最近也宣布對(duì)飼料維生素A漲價(jià)6%,所以飼料中維生素A的檢測(cè)就顯得非常緊急和重要。

賽智科技參考國(guó)標(biāo)(GB/T 17817-2010),利用全新高性能的LC-10Tvp高效液相色譜儀,經(jīng)實(shí)踐檢測(cè)可提供飼料中維生素AHPLC檢測(cè)方案,得出的結(jié)果準(zhǔn)確可靠,檢出限好,適用于配合飼料、濃縮飼料、復(fù)合預(yù)混合飼料、維生素預(yù)混合飼料中維生素A的測(cè)定,僅供廣大用戶參考。

以下是維生素A的測(cè)定的詳細(xì)檢測(cè)方法。

1  儀器與試劑

1.1 儀器
  LC-10Tvp高效液相色譜儀
  Vertex 色譜柱150mm×4.6mm×5μm;
  分析天平,感量為分別為0.001g,0.0001g,0.00001g;
  圓底燒瓶,帶回流冷凝器;
  恒溫水浴鍋;
  旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器;
  超純水器。

1.2 試劑
  無(wú)水乙醚:不含過(guò)氧化物;
  無(wú)水乙醇;
  正己烷,色譜純;
  異丙醇,色譜純;
  甲醇,色譜純;
  2,6-二叔丁基對(duì)甲酚(BHT);
  無(wú)水硫酸鈉;
  氮?dú)猓兌?/span>99%);
  碘化鉀溶液;
  淀粉指示液;
  硫代硫酸鈉溶液;
  氫氧化鉀溶液;
  L-抗壞血酸純品;
  酚酞指示劑;
  1,4-二氧六環(huán);
  維生素A乙酸酯標(biāo)準(zhǔn)品:含量≥99%
  維生素A標(biāo)準(zhǔn)貯備液;
  維生素A標(biāo)準(zhǔn)工作液。

2  試樣溶液的制備

2.1 皂化
  稱取試樣配合飼料或濃縮飼料適量,置入圓底燒瓶中,加L-壞血酸乙醇溶液,使試樣完全分散、浸濕,加氫氧化鉀溶液,混勻,置于水浴上回流,不時(shí)震蕩防止試樣粘附在瓶壁上,皂化結(jié)束,分別用無(wú)水乙醇、水自冷凝管頂端沖洗其內(nèi)部,取出燒瓶冷卻至40℃。

2.2 提取
  定量轉(zhuǎn)移全部皂化液于盛有無(wú)水乙醚的分液漏斗中,用蒸餾水分2~3次沖洗圓底燒瓶并入分液漏斗,加蓋、放氣,隨后混合,激烈震蕩,靜置、分層。轉(zhuǎn)移水相于第二個(gè)分液漏斗中,分次用乙醚重復(fù)提取兩次,棄去水相,合并三次乙醚相。用蒸餾水多次洗滌乙醚提取液至中性,初次水洗時(shí)輕輕旋搖,防止乳化。乙醚提取液通過(guò)無(wú)水硫酸鈉脫水,轉(zhuǎn)移到棕色容量瓶中,加BHT使之溶解,用乙醚定容至刻度。以上操作均在避光通風(fēng)柜內(nèi)進(jìn)行。

2.3 濃縮
  從乙醚提取液中分取一定體積置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器燒瓶中,在水浴溫度約50℃,部分真空條件下蒸發(fā)至干或用氮?dú)獯蹈伞堅(jiān)眉状既芙獠⑾♂?,離心或通過(guò)0.45μm過(guò)濾膜過(guò)濾,用于高效液相色譜儀分析。以上操作均在避光通風(fēng)柜內(nèi)進(jìn)行。

3  色譜條件
  色譜柱:Vertex 色譜柱 150mm×4.6mm×5μm
  流動(dòng)相:甲醇+=95+5;
  流速:1.0mL/min;
  溫度:室溫;
  進(jìn)樣量:20μL;
  檢測(cè)波長(zhǎng):326nm。

4  維生素A標(biāo)準(zhǔn)高效液相色譜圖。

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