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飼料中黃曲霉毒素的HPLC檢測方案 

黃曲霉毒素是由黃曲霉菌和寄生曲霉產(chǎn)生的一類代謝產(chǎn)物,具有極強的毒性和致癌性,能引起多種動物發(fā)生癌變主要誘發(fā)肝癌。黃曲霉毒素廣泛存在于糧油食品中,其中以花生和玉米污染最為嚴重,一般以熱帶和亞熱帶地區(qū)的飼料污染較重。由于它的劇毒性、強致癌性及存在的廣泛性因此建立方便、 快速、 穩(wěn)定的檢測方法顯得尤為重要。

目前黃曲霉毒素檢測的國標方法有薄層色譜法、酶聯(lián)免疫法、免疫親和柱凈化高效液相色譜法。薄層色譜法操作繁瑣、污染大、定量差、耗時長;而酶聯(lián)免疫法雖操作簡單、靈敏度高但特異性差;免疫親和柱高效液相色譜法是柱后衍生法它對于高黃曲霉毒素含量的樣品偏差較大,且柱后衍生不普及,給使用帶來不便。

賽智科技應用檢測部采用自制凈化柱凈化,柱前衍生方法對黃曲霉毒素衍生化處理,利用全新高性能的LC-10Tvp高效液相色譜儀Waters 2475 多通道熒光檢測器經(jīng)實踐檢測可提供飼料中黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1的同時測定的HPLC檢測方案,得出的結(jié)果準確可靠,檢出限好,是一種很好的檢測黃曲霉毒素的方法,僅供廣大用戶參考。

以下是飼料中黃曲霉毒素的測定的詳細檢測方法。

  • 1   儀器與試劑

  • 1.1 儀器

  • LC-10Tvp高效液相色譜儀

  • Vertex 色譜柱 150mm×4.6mm×5μm

  • Waters 2475 多通道熒光檢測器

  • 自制凈化柱

  • 2.1  試劑

  • 甲醇,色譜純。

  • 乙腈,色譜純。

  • 三氟乙酸。

  • 正己烷。

  • 硅膠。

  • 中性氧化鋁。

  • 聚酰胺粉。

  • 黃曲霉毒素標準樣品:純度≥99%

  • 2   試樣溶液的制備

  • 2.1  試樣的提取和凈化

  • 使用粉碎機將飼料樣品研細稱取研細樣品置于燒瓶或攪拌瓶中加入體積分數(shù)為84%的乙腈溶液在旋轉(zhuǎn)震蕩器上震蕩。用漏斗、定性濾紙將其過濾到樣品瓶中將過濾液通過自制凈化柱凈化棄去前面的然后將凈化液轉(zhuǎn)移至潔凈的棕色瓶中在水浴60℃條件下用氮氣吹干。

  • 2.2  柱前衍生條件

  • 向氮氣吹干的剩余物中加入正己烷、三氟乙酸,立即旋緊蓋子。渦旋40℃烘箱中衍生,室溫下氮氣吹干混合物用體積分數(shù)為15%的乙腈溶液溶解殘余物并渦旋,3000 r/ min的速度離心,把已經(jīng)制備凈化好的樣品液進樣到液相色譜分析。

  • 3    色譜條件

  • 色譜柱:Vertex 色譜柱 150mm×4.6mm×5μm;

  • 流動相:乙腈溶液;

  • 檢測器:熒光檢測器,波長:λEx= 360 nm , λEm = 440 nm

  • 流速:1.0mL/min;

  • 溫度:25℃;

  • 進樣量:20μL。

  •  液相色譜圖

  • 利用上述液相色譜條件,5種黃曲霉毒素B1、B2、G1G2、M110 min內(nèi)即可獲得很好的

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  • 在含有黃曲霉毒素B1飼料樣品中添加5種黃曲霉毒素,利用自制凈化柱凈化然后進樣分析。

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  • 參考文獻:

  • [1] AOAC Of ficial Method 994. 08 , Aflat oxins in Corn, Almonds ,Brazil Nuts, Peanuts, and Pistach io Nuts[S] .

  • [2] 劉洋陳枚.糧食與飼料工業(yè),2010.

  • [3] 何暉張琳高效液相色譜法測定飼料中的黃曲霉毒素福建畜牧獸醫(yī),2009,31(2):23-24.


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